1. 實(shí)驗(yàn)室污染是導(dǎo)致假陽性結(jié)果的主要原因

 

  非洲豬瘟野毒感染時(shí)血液和組織中病毒載量非常高，經(jīng)常檢測(cè)到Ct值15左右的樣本。樣本處理和提取的過程中需要進(jìn)行離心操作，這些高濃度的樣本離心時(shí)容易造成氣溶膠污染。對(duì)于血液和組織樣本，檢測(cè)非洲豬瘟病毒應(yīng)該盡可能減少離心操作，這類樣本病毒載量高、樣本較純凈，可以采用免提取檢測(cè)。

 

  實(shí)驗(yàn)室如果長(zhǎng)期檢測(cè)陽性樣本，擴(kuò)增產(chǎn)物中高濃度的目的片段很容易擴(kuò)散到空氣中并不斷累積導(dǎo)致氣溶膠污染。

 

  核酸自動(dòng)提取儀可顯著提高實(shí)驗(yàn)效率，然而，養(yǎng)殖企業(yè)實(shí)驗(yàn)室大多使用中小型核酸自動(dòng)提取儀，并且沒有適當(dāng)?shù)姆牢廴敬胧�，在樣本處理過程中可能出現(xiàn)交叉污染。相對(duì)于氣溶膠污染，樣本處理過程中交叉污染導(dǎo)致的假陽性概率較小。

 

  2. 熒光定量PCR試劑盒污染或者非特異性反應(yīng)

 

  某些試劑盒沒有在GMP車間進(jìn)行生產(chǎn)，或者GMP車間生產(chǎn)過程中車間潔凈度不夠或人員操作不規(guī)范，在試劑盒生產(chǎn)過程中可能出現(xiàn)陽性核酸片段或者質(zhì)粒污染反應(yīng)體系的情況。

 

  某些試劑盒生產(chǎn)工藝不過關(guān)，可能出現(xiàn)非特異性翹尾現(xiàn)象。

 

  試劑盒中引物、探針等原料品質(zhì)不過關(guān)，質(zhì)量控制不嚴(yán)格，也可能導(dǎo)致非特異性反應(yīng)。

 

  3. 熒光定量PCR儀性能不佳導(dǎo)致翹尾

 

  筆者發(fā)現(xiàn)某些熒光定量PCR儀性能不佳，在反應(yīng)后期出現(xiàn)非特異性翹尾峰。

 

  4. 電壓不穩(wěn)導(dǎo)致的基線不穩(wěn)定

 

  很多養(yǎng)殖企業(yè)將實(shí)驗(yàn)室設(shè)置在豬場(chǎng)附近，使用電源大多是農(nóng)用電，電壓不穩(wěn)定，會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增基線不穩(wěn)定。另外，豬場(chǎng)附近的臨床實(shí)驗(yàn)室停電風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較高。建議這些實(shí)驗(yàn)室配備UPS緊急電源。

 

  5. 樣本或者氣泡干擾

 

  反應(yīng)體系中存在氣泡或者某些樣本含有特殊成分可能干擾實(shí)驗(yàn)，產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增曲線，這種擴(kuò)增曲線通常不呈現(xiàn)典型的S型擴(kuò)增曲線形態(tài)。